Zalévání do parafínu

1. Odvodnění
2. Prosycení tkáně tekutinou rozpouštějící parafín
3. Prosycení tkáně parafínem
4. Vlastní zalití

Princip zalévání tkáně do parafínu:

Spočívá v prosycení odvodněné tkáně rozehřátým parafínem při teplotě asi 56 – 58 ´C. Parafín vyplní všechny mikroskopické štěrbiny tkáně, takže se pak tkáň dá krájet v tenkých řezech. Tloušťka  asi 7μm. Pši krájení do parafínu můžeme krájet i sériové řezy.

Nevýhody zalévání do parafínu:

• při odvodňování a prosycování při poměrně vysoké teplotě dochází ke smrštění
• Parafín se nehodí k zalévání tuhých tkání jako je šlacha, chrupavka, odvápněná kost,..V těchto případech použijeme k zalévání zalévací hmotu tiužší konzistence než-li je zalévaná tkáň ( např. Celoidin )
• nelze použít k zalévání tkání, v nichž mají být prokazovány lipidy

1. Odvodňování:

• Provádí se stoupající řadou ethanolů
  • provádíme to proto, abychom se vyhnuli smrštění tkáně, k němuž by došlo, kdybychom tkáň naráz vložili do koncentrovaného ethanolu

• ethanol 96% na 100% pomocí modré skalice ( v termostatu 56% )
• žíhaná modrá skalice ( v termostatu 56% ) v kyvetě.Občas se to promíchá. Odstraní se voda, nasypeme do lahve ( 3 – 4 cm/1 l ), protřepat, týden čekat, skalice zmodrá

2. Prosycení tkáně tekutinami rozpouštějící parafín:

• po odvodnění se musí ethanol dokonale odstarnit, protože se parafín nerozpouští
• proto se prosycuje tkáň takovou látkou, která dobře rozpouští parafín, ale zároveň se mísí s ethanolem
• látky rozpouštějící parafín k prosycení:
  • s nižším bodem varu
    • benzen ( bod varu 80´C )
    • xylen ( bod varu 140´C )
  • s vyšším bodem varu
    • dobře se krájí
    • jsou drahé
    • doba prosycení je o hodně delší
    • tkáň netvrdne
    • methylbenzolát ( bod varu 190´C )
    • methylsalicylát ( bod varu 220´C ) – nepříjemně zapáchá
    • cedrový olej ( bod varu 240´C )

3. Přehled zalévání do parafínu přes benzen:

• benzen a xylen – vysoký index lomu, takže tkáň se po prosycení „projasní“ a stane se „průsvitnou“
• parafíny se dělí podle bodu tání na:
  • měkké ( b.t. Do 50´C )
  • tvrdé ( b.t. Vyšší )
• nejdřív tkáň prosytíme měkkým parafínem, pak tvrdým a pak tvrdým i zalijeme
• parafín nesmí mít víc jak 58´C – hnědne
• parafín zkvalitněný – k vlastnímu zalití, nikdy se nepoužívá parafín, který byl předtím použitý
• zkvalitňování parafínu:
  • v digestoři ( dělalo se to dříve )
    • filtrujeme, abychom se zbavili nečistot
  • minimálně týden necháme parafín v nějaké otevřené nádobě v termostatu ( 58´C ), 3 – 5 g včelího vosku ke 100 g parafínu
    • včelí vosk umožní krájet velmi tenké řezy

Nejčastější chyby při zalévání do parafínu:

1. Parafínový blok je bělavý a drobný – tkáň byla zalita do čerstvého, nepřehřátého parafínu
2. Blok je bělavý a měkký – v parafínu zůstal benzen
3. Blok je v centru bělavý a suchý, tkáň je špatně odvodněna
4. Uprostřed bloku je vkleslina sahající až ke tkání – komůrka byla příliš vysoká anebo byl nesprávný postup při chlazení parafínu