Transferázy(ALT, AST, GMT, CK)

ALT – Alanintransferáza

• převážně v játrech, málo v srdci, ve svalech
• hodnoty: muži 0,21 – 0,79 μkat/l

ženy 0,18 – 0,55 μkat/l

• když je v krvi ↑ ALT → obstrukční ucpání žlučových cest
• ALT je ↑ i u nádorových onemocnění, u srdečního selhání jaterního původu
• pro stanoveí se nejvíc používá sérum, příp. K₃EDTA
• stanovení: kinetika – měří se úbytek NADH + H⁺
  • nejprve dochází k preinkubaci pracovního roztoku, sérum (10min.)
  • pak se přidá prac. roztok 2.
  • pufr v 1. roztoku převedl pyruvát na laktát
  • přidáním roztoku 2 (2-oxoglutarát) dochází k vlastní transaminaci (reakce ala a 2-oxoglutarát za vzniku pyruvátu a glutamátu)
• další možné měření – 2,4 dinitrofenylhydrazin + 2-oxoglutarát ↔ hydrazon

AST – Aspartáttransferáza

• dochází k přenosu mezi aspartátem a 2-oxoglutarátem ↔ oxalacetát (mění se na kys. Jablečnou) + glutamát
• nachází se ze 65% v cytoplazmě a 35% v mitochondriích
• uložen v kosterním a srdečním svalstvu → srdeční marker
• de Ritirův kvocient normálně 1 – 1,3
  • vyšší – infarkt myokardu nebo cirhóza
  • nižší – akutní hepatitidy, monukleóza
• méně AST – pouze při nižší hladině B₆
• stanovení: princip stejný jako u stanovení ALT nebo 2,4-dinitrofynylhydrazin + 2-oxoglutarát + pyruvát ↔ hydrazon

GMT – γ Glutamyltransferáza (GGT,  γGT)

• fce- přenos zbytku γ-glutamylu a glutathionu na jinou kyselinu
• uložena v cytoplazmatické membráně, skoro ve všech orgánech
• glutathion – oxidační stres, jeden z markerů
• ↑ GMT – jaterní onemocnění
• ↑ GMT a AST – obstrukce žlučových cest
• hodnoty: < 1,2 (1,25) μkat/l
• stanovení:
  • s nerozpustným substrátem
  • s rozpustným substrátem (IFCC) – absolutní metoda, za normálních podmínek se neprovádí

CK – Kreatinkináza

• katalyzuje vratnou fosforylaci kreatinu

kreatin + ATP ↔ kreatinfosfát + ADP

• lokalizace: cytoplazma a mitochondrie kosterního svalstva, srdce, mozku
• CK je dimer – 2 podjednotky → M, B → 3 izoenzymy – CK – MM, CK – MB, CK – BB
• význam:
  • Onemocnění srdce ( za 3-6 hodin ↑ po IM)
  • onemocnění svalů ( poškození, traumata, zánět)
  • onemocnění CNS ( CK – BB ↑)
• fyziologické meze: muži 1,03 – 3,55 μkat/l

ženy 0,80 – 2,12 μkat/l

• stanovení: sérum ( 95% CK – MM + 5% CK – MB

plazma heparin

• Před stanovením CK se musí provést aktivace CK reakcí s N-acetylcysteinem (NAC), protože se CK v séru samovolně inaktivuje.

1. substrát kreatinfosfát
   1. a) kreatinfosfát + ADP ↔ kreatin + ATP
   2. b) glukóza + ATP ↔ glukóza – 6 – fosfát + ADP
   3. ^c) glukóza – 6 – fosfát + NADP ↔ 6 – fosfoglukonát + NADPH + H⁺

• přírůstek A při 340 nm, pH 6,5, pufr imidazolový, Mg⁺

2. substrát + kreatin
   1. a) kreatin + ATP ↔ kreatifosfát + ADP
   2. b) ADP + fosfoenolpyruvát ↔  pyruvát + ATP
   3. ^c) pyruvát + NADPH + H⁺ ↔ laktát + NAD⁺

– úbytek A pA^– 340 nm

CK – MB

stanovení:

1. fotometricky imunoinhibiční reakcí
   • využívá se specifických protilátek proti M – podjednotce → inhibice MM a z 50% MB → stanovíme CK – B, výsledek násobíme 2x ( tím dostaneme konc. CK – MB)
2. elektroforeticky – agar, agaróza, acetocelulóz. f.
   • Různá pohyblifost v el. poli
3. izoelektrická fokusace
4. iontoměničová chromatografie – ref. metoda pro CKMB

CK – MB mass

– měříme reakci monoklonálních protilátek proti CK – MB