POLYSACHARIDY

= složené sacharidy

• zahrnující širokou skupinu látek různých chemických vlastností, jejichž společným znakem je rozhodující účast sacharidů na jejich skladbě
• obsahují v molekule více než 10 monosacharidových jednotek
• skládají se buď:
  • monosacharidů
  • látek jiné povahy
• mohou se skládat z monosacharidových jednotek jednoho typu ( př. Glukózy )
• HOMOPOLYSACHARIDY – glykogen ( není vázán na bílkovinu, je v játrech → hepatocytech, buňkách myokardu )
• vedle sacharidů obsahují i látky jiné povahy ( protein → mukoprotein , mukosacharidy, glykoprotein, glykolipidy – v mozku )
• mezi kyselé mukopolysacharidy patří kyselina hyalurová → v chrupavkách
• základní reakce ( metoda ): PAS – reakce ( Periodic Acid Schiffovo reagens )
  • princip: oxidace polysacharidů za vzniku aldehydů, které regují s Schiffovým reagens fialově červeným zbarvením
  • provbedení:
    • řezy odparafínovat a zavodnit do 70% alkoholu
    • oxidace kyselinou jodistou…………………………10 min.
    • redukce řezů v sirnatanové lázni…………………30 sek.
    • Oplach řezů v 70% alkoholu
    • oplach v destilované vodě → krátce
    • Schiffovo reagens…………………………………10 – 20 min.
    • řezy prát v pramenité vodě………………………….20 min.
    • oplach v destilované vodě
    • jádra dobarvit hematoxilinem……………………….2 min.
    • řezy diferencovat a nechat zmodrat………………10 min.
    • řezy odvodnit, projasnit a montovat do kanadského balzámu

→ NE DO 100%  ALKOHOLU ( místo toho 2x 96% ) + xylen I, II, III

• výsledek: polysacharidy a neutrální substance, glykoproteiny, glykolipidy, sekrety slinných žláz – fialově červeně

jádra – modrá

Natrávený PAS

• po odparafínování na preparát neneseme sliny, necháme působit 30 min. a po opláchnutí řezů barvíme běžným způsobem
• roztoky:
  • Kyselina jodistá – Acidum Perioideum, 0,5g do 100 ml 70% alkoholu
  • Sirnatanová lázeň – Kalium Jodatum….10g, sirnatan sodný….10g, 1N Hcl…..10ml, destilovaná voda….125ml
  • Schiffovo reagens:
    • 1g krystalického bazického fuschinu do 200ml vařící destilované vody → třepat 5 min. a chladit na 50ºC
    • filtovat → přidat 20 ml 1 N Hcl
    • roztok ochladit na 25ºC a přidat 1 g Kalium Metabisulfitu ( bezvodého siřičitanu draselného kyselého )
    • baňku s roztokem zazátkovat a nechat stát přes nnoc ve tmě při pokojové teplotě
    • roztok má slámově žlutou barvu
    • uchovat v lednici

PRŮKAZ GLYKOGENU

• polysacharidy
• dobře rozpustný ve vodě ( kyselina pikrová + formol → sráží nám glykogen v nerozpustná zrníčka, která se nám dobře obarví )
• metody:
  • PAS reakce ve spojení s kontrolní reakcí
  • barvení glykogenu Bestovým karmínem → specifická metoda
  • reakce β – chromatická – toluidinová modř → používá se k barvení

PRŮKAZ KYSELÝCH MUKOPOLYSACHARIDŮ

• hlavně:
  • Barvení alciánovou modří: výsledek – modrá
  • Heleho metoda → barvení diazovaným železem: výsledek – modrozelená

BARVENÍ NA HLEN

PAS reakce – barvení na kyselé mukopolysacharidy ( alciánová modř ), barvení hemomucikarminem ( výsledek – červená ) → zastaralá metoda

Fixace: Bouenova tekutina